Κοντά στο να αποκαλύψει τα μυστικά του βρίσκεται και ο τρίτος θάλαμος στον τάφο της Αμφίπολης. Το βάθος του είναι εμφανώς μεγαλύτερο από ό,τι αυτό των προηγούμενων θαλάμων αλλά και τα σκαλιά που εκτιμάται από τους αρχαιολόγους ότι υπάρχουν στο σημείο.
Ο πρώτος και ο δεύτερος θάλαμος έχουν ύψος από το έδαφος περίπου 6,5 μέτρα. Το ύψος του τρίτου θαλάμου, ωστόσο, ξεπερνάει τα 7 μέτρα και σύμφωνα με τις εκτιμήσεις τα δάπεδο του πηγαίνει ακόμα βαθύτερα.
Σύμφωνα με τις εκτιμήσεις, από το βόρειο τοίχο του τρίτου δωματίου (τον λεγόμενο και κίτρινο τοίχο) ξεκινούν σκαλιά που φτάνουν μέχρι την έκκεντρη πύλη που έχει αρχίσει να αποκαλύπτεται προς τον τέταρτο θάλαμο. Αυτή η πύλη κατεβαίνει πιο βαθιά, είναι μετατοπισμένη προς τα αριστερά και δεν βρίσκεται στο κέντρο του τοίχου, ενώ έχει άνοιγμα 96 εκατοστά. Για να αντιληφθεί κανείς τη διαφορά που υπάρχει σε σχέση με τα προηγούμενα ανοίγματα αρκεί να αναφέρουμε ότι η απόσταση ανάμεσα στις Καρυάτιδες αλλά και τις παραστάδες στην είσοδο της πρόσοψης, κάτω από τις Σφίγγες, είναι 1,68 μέτρα.
Με αυτή τη μικρή θύρα πλέον είναι 4 οι είσοδοι που έχουν βρεθεί μέχρι στιγμής. Η πρώτη είναι αυτή κάτω από τις Σφίγγες, η δεύτερη βρίσκεται ανάμεσα στις Καρυάτιδες, η τρίτη είναι αυτή που βρίσκεται στον τρίτο διαφραγματικό τοίχο και φέρει μαρμάρινο, ιωνικού ρυθμού, περιθύρωμα.
